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人ELISA试剂盒样本处理实验要求人
文章来源:江苏晶美生物科技有限公司   添加时间:2022/2/10 16:09:37 点击率:1230

ELISA试剂盒实验原理:
      人ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠丙二醇(SDA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠丙二醇(SDA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
人ELISA试剂盒样本处理及要求:
      1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
      2.血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
      3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。*后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
      4.细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
      注:标本溶血会影响*后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
人ELISA试剂盒注意事项:
      1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
      2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
      3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
      4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
      5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
      6.在储存和温育时避免强光直接照射。
      7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
      8.任何反应人ELISA试剂盒不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
      9.不能使用过期产品。
      10.如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

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