ELISA检测时样本实验准备步骤

在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。液体类标本：  包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1血清：

    室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2血浆：

    应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3尿液：

    用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4细胞培养上清：

    检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右-3000转/分）。仔细收集上清。

5培养细胞

    检测细胞内的成份时，用PBS（PH7。2-7。4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6组织标本

    切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7。4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7。4），或组织蛋白萃取试剂， 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。