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影响ELISA试剂盒测定成果的原因和解决办法
文章来源:江苏晶美生物科技有限公司   添加时间:2021/9/24 14:57:56 点击率:94

ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定,具有灵敏度高,操作简略等优点,但是在详细实验过程中影响要素较多,而且要按照严厉的阐明要求,在临床检验中除正常反响外,有时常可见到一些错误成果(即假阳性或假阴性成果)。
  影响ELISA测定错误成果的原因主要有:
   ①标本要素;
   ②试剂要素;
   ③操作要素。
  一、类风湿因子
   人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)能够与ELISA系统中的捕获抗体及酶符号二抗的FC段直接结合,然后导致假阳性。
解决办法:
  1.用F(ab)2替代完好的IgG;
  2.标本用联有热变性(63℃,10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有用);
  3.检测抗原时,能够用2-巯基yi醇等加入到标本稀释液中,使RF降解。
  二、补体
   ELISA系统中固相一抗和符号二抗过程中,抗体分子发作变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q 能够将二者连接起来,然后形成假阳性。
解决办法:
  1.用EDTA稀释标本;
  2.用53℃,10 min或56℃,30 min加热血清使C1q灭活。
  三、嗜异性抗体
   人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig(s) 结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,也能形成假阳性。
解决办法:
   可在标本稀释液中加入过量的动物Ig(s),但加入量不足或亚类不同时无效。
  四、嗜靶抗原的本身抗体
   抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的本身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定成果。
解决办法:

   测定前需用理化方法将其解离后再测定。

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