正文
ELISA试剂盒常见问题有哪些?
文章来源:江苏晶美生物科技有限公司   添加时间:2021/8/27 11:03:12 点击率:175

Top1:标曲显色过强无明显梯度

  1、主要怀疑点:洗板不充分:

    1.1、机器洗版:确保机器设置的针头能吸干孔中液体,并且加液针头能加液大于350ul,加液针头没有被异物或者结晶盐堵住。

    1.2、手动洗板,严格按照步骤,使用干净灭菌的枪头和加样槽,使用无氧化剂的吸水纸。加350ul洗液,静置90秒,在吸水纸上拍干孔中液体后再加入下一步洗液或者试剂。

    1.3、特别注意,在加入TMB前的洗板步骤极其重要,残留的HRP酶会直接导致TMB显色。

  2、次要怀疑点:

2.1、TMB 已经污染,检测TMB是否透明无色,如果偏蓝就是污染了。

    2.2、检查配制洗液的水是否污染,要求使用的水是双蒸水,三蒸水或无离子水,水中的Fe3+,Cu3+,Co3+等过渡金属,以及HClO都会氧化TMB。

2.3、酶标板受潮,长霉,或者试剂过期。

2.4、环境污染,空气中有导致显色的物质或者粉尘。

Top2:显色较弱或不显色,没有说明书提供的数据阳性强

可能原因分析:

1、检查标准品是否受潮或者拿错

    2、检查试剂是否按照说明书中要求的保存条件保存,特别是浓缩检测抗体和浓缩SABC, 如果放在-20度,融化后会严重影响其活性。

    3、移液器是否校准,可以用去离子水较准移液器,1000ul=1.0g  100ul=0.1g  10ul=10mg

    4、37度培养箱是否校准温度(建议用水银温度计放入水杯中,平衡12小时以上进行测量)。

5、SABC工作液和TMB在孵育前进行37度平衡半小时。

6、未严格按照说明书纸质版提供的方法操作。

7、试剂盒过期。

Top3:复孔做的不好,CV值差异大

可能原因分析:

    1、复孔OD450数值在0.5-2.5之间计算的偏差相对较小,小于0.5会由于操作误差导致计算的CV值偏高,复孔样品数量在5-10个最佳。

    2、操作时按照标准动作进行加样,比如要求枪头不能碰触到孔壁内侧和底面,枪头尖部的残留液体可以触碰到液面,使之流入样品孔。

3、加样尽量快速准确,不要产生气泡。

    4、样品需要做预实验,使用不同浓度进行测试,找到最佳稀释比。错误的稀释比会导致复孔误差大

            

上一条新闻:标准品使用时的注意事项      下一条新闻:ELISA样本到底是用血清还是血浆      
 

地址:江苏省大丰国际软件园1号楼6F 邮编:224100 电话:0515-87103988 传真:0515-83911098 邮箱:jsjingmeibio@163.com
CopyRight @ www.jsjmsw.com 江苏晶美生物科技有限公司 .All Rights Reserved 备案号:苏ICP备15003087号 网站地图

 

客户服务热线

0515-87103988

在线客服