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ELISA 样本的处理教程
文章来源:江苏晶美生物科技有限公司   添加时间:2020/9/3 8:12:14 点击率:76

ELISA 检测的目的是为实验提供准确可靠的定量分析实验依据。为了保证实验数据的可靠性,在实验过程中必须坚持全面质量控制和全过程质量控制。在收集标本前都必须有一个完整的计划。

一、标本类型

ELISA 常见的标本一般包括:

◆ 液体类标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等

◆ 培养细胞

◆ 组织标本

这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。


二、标本的保存

一般说来,在5天内测定的标本可放置于 4℃,超过一周测定的需低温冻存。对收集后当天进行检测的标本,储存在 4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在 -20℃或 -70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃ 可保存48小时,-20℃可保存1个月,-70℃可保存6个月。部分标本也可加入适当防腐剂,激素类标本需添加抑肽酶。

三、样本的处理

◆ 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

◆ 血浆:应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入10 %(v/v)抗凝剂(0.1M 柠檬酸钠或1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

◆ 尿液、胸腹水、脑脊液:

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

◆ 细胞培养上清:

检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。

检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

◆ 细胞:

检测细胞的成份时,对于贴壁细胞,去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细10秒后,细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞,离心收集细胞,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液, 用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

如果细胞量较多,必需分装然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续操作。

◆ 组织标本:

切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS 或组织蛋白萃取试剂,缓冲液中可加入蛋白酶抑制剂。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清置于 -20度或 -70度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

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