细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中，及时冻存原始细胞是十分重要的。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败，所以在实验过程中细胞冻存是十分重要的步骤，接下来就向大家介绍一下细胞冻存的方法。

1、冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。

2、配制冷冻保存溶液（使用前配制）：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMSO）至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。

3、离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液（约0.1ml）计数细胞浓度及冻前存活率。

4、取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液（DMSO最后浓度为5～10%），使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期，然后进行冻存。

稳定的细胞是能够顺利进行实验的前提，所以大家一定要重视这个问题，及时将细胞进行冻存。